细胞骨架是一种网状的纤维结构，高度动态，在不同阶段呈现不同形态。它主要由微丝、微管和中间丝组成。微丝主要由肌动蛋白构成，肌动蛋白有两种形式：单体的球状肌动蛋白（G-actin）和多聚体的纤维状肌动蛋白（F-actin）。微丝的组装涉及G-actin向F-actin的转化。

鬼笔环肽是一种双环七肽，是最早发现的环肽之一，从毒鹅膏（Amanita phalloides）中分离出来。它通过结合并稳定纤维状肌动蛋白（F-actin）发挥作用，并有效防止肌动蛋白纤维的解聚。由于鬼笔环肽与F-actin的紧密结合和选择性，它能够揭示细胞内微丝骨架的分布。因此，含有鬼笔环肽的荧光标记已广泛用于生物显微镜技术中。

Arcegen Biological提供的鬼笔环肽产品种类繁多，主要根据使用的不同的荧光团进行区分，从而在激发时产生不同的荧光颜色。这有助于在选择适当的设备时满足激发和发射波长的要求，从而在共染色时区分其他荧光染料的荧光颜色。
 

实验程序

鬼笔环肽的准备
 

将0.1毫克的鬼笔环肽溶解在1毫升的无水甲醇中（也可以使用DMSO或无水乙醇溶解），以制备母液，该母液可以在黑暗中长期存放在-20°C的环境中。工作液浓度为5微克/毫升，是从母液中用PBS稀释20倍得到的。

染色程序

将细胞用PBS缓冲液冲洗两次，每次10分钟。用3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定细胞20分钟，然后用PBS缓冲液冲洗细胞两次。加入5微克/毫升的FITC标记鬼笔环肽，在室温下进行染色30-60分钟（夏季时间更短）。用PBS缓冲液冲洗细胞两次。用DAPI或Hoechst33258染色细胞核10分钟，然后用PBS缓冲液冲洗细胞两次。去除多余的水分，加入荧光封片液（中性或微碱性缓冲液与等量的甘油混合），盖上盖玻片，在荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察。

客户案例

客户来源：四川大学华西口腔医学院

细胞类型：骨髓间充质干细胞

比例尺：100微米

参考文献：Zhu Z, Jiang S, Liu Y, 等. 微米或纳米：不同粒径镁金属有机框架-74的生物安全性和生物效能评估。纳米研究，2020, 13(2):511-526.

产品介绍：使用的染色产品是FITC标记的鬼笔环肽，它呈现绿色荧光。该图像是通过MTT实验以及FITC标记的鬼笔环肽和DAPI染色获得的，用以确定Mg-MOF74对骨髓间充质干细胞（BMSCs）的安全剂量，确保后续实验在安全剂量范围内进行。
 

细胞类型：骨髓间充质干细胞

比例尺：50微米

参考文献：Fan Z, Xiao L, Lu G, Ding Z, Lu Q. 水溶液中不溶性无定形丝素蛋白支架。生物医学材料研究B应用生物材料。2020;108(3):798-808. doi:10.1002/jbm.b.34434

产品介绍：使用的染色产品是罗丹明标记的鬼笔环肽，它呈现红色荧光。图像显示了罗丹明标记的鬼笔环肽染色和DAPI核染色，观察了骨髓间充质干细胞在不同再生丝素蛋白支架上分化为内皮细胞的情况，使用共聚焦显微镜进行观察。

结论

荧光和生物素标记的鬼笔环肽衍生物与肌动蛋白抗体相比具有显著优势。鬼笔环肽衍生物的结合在不同物种（包括动物和植物）之间保持一致，并且不会因肌动蛋白的变化而受到显著影响。此外，它们的非特异性染色可以忽略不计，因此在染色和未染色区域之间形成了高对比度。

注意事项

1. 鬼笔环肽具有低分子量，能够轻松穿透细胞，无需预先用冷丙酮或TRITON X-100处理。

2. 它们具有高毒性；因此，在操作时请戴上手套。

产品特点

1. 高亲和力：解离常数Kd为20纳摩尔（nM）。

2. 强特异性：选择性地结合纤维状肌动蛋白（F-actin），而不结合单体的球状肌动蛋白（G-actin）。

3. 优于抗体染色：鬼笔环肽不受物种限制，并且表现出极小的非特异性染色，使得染色区域和未染色区域之间的对比度非常清晰。

4. 高灵敏度：在纳摩尔浓度（nM）下的染色满足实验要求。

5. 良好的兼容性和肌动蛋白活性保持：鬼笔环肽衍生物体积小，直径约为12-15埃（Å），分子量小于2000道尔顿（Da），这使得标记的肌动蛋白的许多生理特性得以保持。

6. 广泛的适用性：没有物种特异性；同样适用于甲醛固定的和穿孔的组织样本。
 

常见问题解答

Q1: 可以在活细胞中进行鬼笔环肽染色吗？
A: 鬼笔环肽染色需要对样本进行固定和通透化处理，以促进鬼笔环肽与F-actin之间的结合，从而获得更好的染色效果。

Q2: 我的细胞样本已经转染了带有GFP标签的质粒。我应该选择哪种鬼笔环肽？
A: 你可以选择用TRITC（橙色）、iFluorTM 555（橙色）或iFluorTM 647（远红）标记的鬼笔环肽。

Q3: 染色贴壁细胞需要多少工作液？
A: 染色贴壁细胞只需要足够的工作液来完全覆盖细胞。

Q4: 不同的鬼笔环肽有什么区别，我该如何选择？
A: 区别在于用于标记的荧光团，它们在激发时会产生不同的荧光颜色。这有助于在共染色时区分其他荧光染料的荧光颜色。选择时应基于机器对激发和发射波长的要求。

Q5: 鬼笔环肽染色有物种特异性吗？
A: 在染色活体动物细胞时没有物种特异性。

相关产品